2 просмотров
Рейтинг статьи
1 звезда2 звезды3 звезды4 звезды5 звезд
Загрузка...

Методы качественного и количественного определения пигментов в моче

Определение кровяного пигмента в моче

Оснащение рабочего места

При данном виде анализа мочи рабочее место должно быть оснащено следующими элементами:

  1. Пробирки.
  2. Пипетки.
  3. Капельницы.
  4. Гваяковая смола.
  5. Бензидин.
  6. Пирамидон.
  7. Ледяная уксусная кислота.
  8. Эфир.
  9. 96° спирт.
  10. Пергидроль.

Методика определения кровяного пигмента в моче

Данная методика основана на следующем принципе: гемоглобин обладает свойством отнимать кислород от пероксидных соединений и отдавать его другим веществам (гваяковой смоле, бензидину, пирамидону); в результате этого образуются красящие вещества. Так, при реакции с бензидином получают зеленое или синее окрашивание, с гваяковой смолой — синее, с пирамидоном — фиолетовое.

При определении кровяного пигмента в моче придерживаются следующих правил:

1. Исследование производят в свежеполученной и хорошо взболтанной моче, в абсолютно чистой посуде. В постоявшей моче гемоглобин превращается в метгемоглобин, не обладающий пероксидазными свойствами, что может послужить причиной отрицательных результатов исследования.

2. Для реакции используют химически чистые и не вышедшие из срока годности реактивы.

3. Концентрируют гемоглобин и освобождают мочу от некоторых сопутствующих веществ (миогемоглобин, хром, медь, йодистый калий, бромистый калий и др.), дающих аналогичный результат реакции. Для этого готовят уксусно-эфирную вытяжку. С этой целью в химическую пробирку наливают 8-10 мл хорошо взболтанной нефильтрованной мочи (если не соблюдать этих указаний, то можно получить отрицательные результаты), 2 мл ледяной уксусной кислоты и 4-5 мл эфира; содержимое пробирки встряхивают и оставляют в штативе на несколько минут для отделения уксусно-эфирной вытяжки, в которую переходит гемоглобин в виде гематина. Верхний слой (уксусно-эфирная вытяжка) используют для проведения реакции.

4. Готовят 3% раствор перекиси водорода из свежего пергидроля : к 3 частям пергидроля прибавляют 27 частей дистиллированной воды. Раствор готовят непосредственно перед употреблением.

Кровяной пигмент выявляют следующими реакциями:

  1. реакцией с гваяковой смолой;
  2. реакцией с бензидином;
  3. реакцией с пирамидоном.

Рассмотрим данные виды реакций более подробно

Реакция с гваяковой смолой

Для постановки этой реакции применяют свежеприготовленный насыщенный раствор гваяковой смолы. В пробирку помещают щепотку (на кончике ножа) гваяковой смолы и приливают 2-4 мл 96° спирта, растворяют до цвета крепкого чая. В реакции используют раствор без осадка.

Постановка реакции. В отдельную пробирку помещают 2-3 мл уксусно-эфирной вытяжки и прибавляют 8-10 капель свежеприготовленного насыщенного спиртового раствора гваяковой смолы и 8-10 капель 3% перекиси водорода.

При наличии кровяного пигмента образуется синее окрашивание. При незначительном содержании кровяного пигмента соответствующее окрашивание может появиться не сразу, а через несколько минут после начала реакции.

Реакция с бензидином

Для постановки реакции применяют 5% раствор бензидина в ледяной уксусной кислоте. Реактив готовят следующим образом: 0,5 г химически чистого беизидииа помещают в цилиндр и доливают до 10 мл ледяной ускусной кислотой. Приготовленный реактив должен быть бесцветным.

Постановка реакции. В пробирку помещают 2-3 мл уксусно-эфирной вытяжки, после чего прибавляют 8-10 капель 5% раствора бензидина и 8-10 капель 3% перекиси водорода.
При наличии кровяного пигмента образуется зеленое окрашивание.

Реакция с пирамидоном

Для реакции в качестве реактива применяют 5% раствор пирамидона: 0,5 г пирамидона помещают в цилиндр и доливают до 10 мл 96° спиртом.

Постановка реакции. В пробирку помещают 2-3 мл уксусно-эфирной вытяжки, прибавляют 8-10 капель 5% спиртового раствора пирамидона и 8-10 капель 3% перекиси водорода.
При наличии кровяного пигмента образуется фиолетовое окрашивание.

В случае выявления кровяного пигмента в бланке анализа указывают: «кровяной пигмент обнаружен».

Методы количественного определения форменных элементов в моче

При обычном микроскопическом исследовании осадка мочи не всегда удается выявить патологию, особенно в начальных стадиях заболевания. Несоблюдение стандартных условий при проведении данного исследования, когда не учитывается количество выделенной мочи, объем мочи, взятой для центрифугирования, площадь поля зрения микроскопа, толщина слоя мочи и другие моменты, значительно снижает ценность анализа и ограничивает возможность динамического наблюдения за патологическим процессом. Поэтому методы количественного определения форменных элементов в моче, позволившие в значительной мере объективизировать исследование мочи, получили значительное распространение.

Количественные методы микроскопического исследования осадка мочи по сравнению с ориентировочным методом обладают следующими преимуществами:

подсчет элементов производится в счетной камере,

подсчет лейкоцитов, эритроцитов и цилиндров производится в определенном объеме (1 мл) или за определенное время (сутки, час, минута).

К методам количественного определения форменных элементов в моче относятся:

В практике отечественных лечебных учреждений большую распространенность получил метод Нечипоренко, как наиболее простой и удобный.

Независимо от избранного метода определения количества форменных элементов в моче, необходимо строгое соблюдение стандартных условий, что обеспечивает воспроизводимость и точность результатов.

Клиническое значение методов количественного определения форменных элементов в моче

Методы количественного определения форменных элементов в моче:

позволяют определить точное количество эритроцитов, лейкоцитов и цилиндров, выделенных с мочой;

выявляют скрытую (не обнаруживаемую при ориентировочной микроскопии) лейкоцитурию, которая часто наблюдается при хронических, скрытых и вялотекущих формах гломерулонефрита и пиелонефрита;

помогают в диагностике заболеваний почек (для многих болезней почек характерно определенное соотношение между клеточными элементами, их диссоциация: при хроническом пиелонефрите количество лейкоцитов, как правило, преобладает над числом эритроцитов (характерное соотношение может отсутствовать при калькулезном пиелонефрите), а при хроническом гломерулонефрите и артериосклерозе почек отмечается обратная зависимость);

Читать еще:  Какой массаж полезен при импотенции

позволяют проводить динамическое наблюдение за течением заболевания и осуществлять контроль за проводимым лечением.

Следует отметить, что при отрицательных результатах количественного исследования лейкоцитурии у пациентов с подозрением на латентно текущий хронический пиелонефрит следует проводить повторный подсчет лейкоцитов после провокационной пробы (например, преднизолонового теста).

Диагностическая ценность количественных методов исследования мочи увеличивается, если одновременно с подсчетом количества клеток определять их морфологические особенности, то есть качественный состав лейкоцитов в осадке мочи.

Метод Каковского-Аддиса является унифицированным методом количественного определения форменных элементов в суточном объеме мочи. Этот наиболее трудоемкий и имеющий много недостатков метод все реже применяется на практике в последнее время.

Подготовка пациента. При исследовании мочи по методу Каковского-Аддиса во избежание получения заниженных данных, обусловленных распадом форменных элементов в нейтральной или щелочной моче, а также в моче с низким удельным весом, пациенту в течение суток, предшествовавших исследованию, назначают мясную диету и ограничивают прием жидкости. При этих условиях обычно стандартизуется удельный вес мочи (1020 — 1025) и ее pH (5,5).

Сбор мочи. Классический вариант исследования мочи по методу Каковского-Аддиса требует строго соблюдать правила сбора мочи и ее хранения в течение длительного времени. При этом мочу собирают в течение суток: утром больной освобождает мочевой пузырь, а затем в течение 24 часов собирает мочу в сосуд с 4 — 5 каплями формалина или 2 – 3 кристаллами тимола, мочу следует хранить в холодильнике.

Однако на практике чаще пользуются другим, более простым способом сбора мочи — мочу собирают за 10 – 12 часов. При этом способе страдает точность результата. При данном варианте сбора мочи для метода Каковского-Аддиса перед сном больной опорожняет мочевой пузырь и отмечает это время. Утром, через 10 – 12 часов после вечернего мочеиспускания, пациент мочится в приготовленную посуду, вся моча отправляется в лабораторию для исследования. На бланке направления должно быть указано, в течение какого времени была собрана моча. При невозможности удержать мочу в течение 10 — 12 часов пациент собирает ее в несколько приемов, соблюдая условия ее хранения. У женщин мочу собирают катетером.

Оборудование: мерная центрифужная пробирка, пипетка на 10 мл, счетная камера (Горяева, Фукса-Розенталя или Бюркера), стеклянная палочка, микроскоп.

Ход исследования: доставленную мочу тщательно перемешивают, измеряют ее количество и отбирают для исследования количество, соответствующее 12 минутам или 1/5 часа. Это количество определяют по формуле:

Q – количество мочи (в мл), выделенное за 12 минут,

V – общий объем собранной мочи (в мл),

t – время (в часах), за которое собрана моча,

5 – число для расчета объема мочи, выделенной за 12 минут.

Рассчитанное количество мочи помещают в градуированную центрифужную пробирку и центрифугируют 3 мин при 3500 об/мин, или 5 минут при 2000 об/мин. Отсасывают верхний слой, оставляя 0,5 мл мочи вместе с осадком. Если осадок превышает 0,5 мл, то оставляют 1 мл мочи. Осадок с надосадочной жидкостью тщательно перемешивают и заполняют камеру Горяева (или другую счетную камеру). В этой камере подсчитывают раздельно количество лейкоцитов, эритроцитов и цилиндров (эпителиальные клетки мочевыводящих путей не считают).

Примечание. Для подсчета цилиндров необходимо просмотреть не менее 4 камер Горяева (или Бюркера) или 1 камеру Фукса-Розенталя. Количество цилиндров, сосчитанное в 4 камерах Горяева или Бюркера, затем следует разделить на 4, а уже потом полученное число можно вставлять в формулу для определения количества цилиндров в 1 мкл осадка мочи.

Рассчитывают количество форменных элементов в 1 мкл осадка мочи (x). При подсчете в камере Горяева и Бюркера x = H/0,9, где H – количество подсчитанных в камере клеток, а 0,9 – объем камеры. При подсчете в камере Фукс- Розенталя x = H/3,2, так как объем камеры 3,2 мм3.

Затем, исходя из того, что для исследования было взято 0,5 мл, или 500 мм3, полученные количества форменных элементов в 1 мм3 умножают на 500 (а при осадке в 1 мл – на 1000), и получают количество форменных элементов, выделенных с мочой за 12 минут. В пересчете на 1 час это количество умножают на 5, а при расчете за сутки – еще на 24. Так как, 500, 5 и 24 являются постоянными числами, то соответственно полученное количество эритроцитов, лейкоцитов и цилиндров (x) умножают на 60 000, если в пробирке для исследования было оставлено 0,5 мл мочи, или на 120 000, если осадок был обильный и был оставлен 1 мл.

Нормальные значения форменных элементов для метода Каковского-Аддиса

Число Каковского-Аддиса для нормальной мочи составляет до 1 000 000 для эритроцитов, до 2 000 000 для лейкоцитов, до 20 000 для цилиндров. Некоторые авторы указывают другие цифры для метода Каковского-Аддиса: эритроцитов – до 2 000 000 – 3 000 000, лейкоцитов – до 4 000 000, цилиндров – до 100 000.

Преимущество метода Каковского-Аддиса. Преимущество метода заключается в том, что при сборе мочи за 24 часа учитываются суточные колебания выделения форменных элементов с мочой.

Недостаток метода Каковского-Аддиса.

не каждый больной может удержать мочу в течение 12 часов, особенно при никтурии;

не каждый пациент может самостоятельно полностью опорожнить мочевой пузырь (аденома, рак предстательной железы);

получение мочи путем катетеризации возможно лишь в лечебном учреждении;

Читать еще:  Лекарства для потенции мужчин не повышающие давление

метод Каковского-Аддиса трудно применим в детской практике;

повышение показателей при данном исследовании может наблюдаться не только при патологии почек, но и при хронических гнойных процессах, воздействии ядов (отравление сулемой, угарным газом), гепаринотерапии;

главный недостаток метода – более низкая информативность: при сборе мочи за 12 или 24 часа частями необходимость длительного хранения мочи ведет к частичному лизису форменных элементов (особенно лейкоцитов) за счет щелочного брожения, что приводит к ложным результатам;

метод Каковского-Аддиса не является экспресс-методом;

метод непригоден при одностороннем поражении почек (дает суммарный результат).

Метод Амбурже относится к методам количественного определения форменных элементов в моче. При этом определяется количество форменных элементов, выделенных с мочой за 1 минуту.

Подготовка больного. Больному ограничивают прием жидкости днем и исключают ночью.

Сбор материала осуществляется в соответствии с основными правилами сбора мочи, отличительной особенностью сбора мочи для метода Амбурже является то, что утром больной опорожняет мочевой пузырь, замечает время и ровно через 3 часа собирает мочу для исследования. Мочу сразу отправляют в лабораторию на исследование.

Оборудование: мерная центрифужная пробирка, пипетка на 10 мл, счетная камера (Горяева, Фукса-Розенталя или Бюркера), стеклянная палочка, микроскоп.

Ход исследования: доставленную порцию мочи измеряют, хорошо перемешивают и отливают 10 мл в градуированную центрифужную пробирку. Центрифугируют 5 мин при 2000 об/мин, затем осторожно отсасывают верхний слой, оставляя точно 1 мл вместе с осадком. Осадок с надосадочной жидкостью перемешивают и взвесью заполняют счетную камеру. Раздельно подсчитывают число лейкоцитов и эритроцитов во всей камере.

Производят подсчет клеток в 1 мкл осадка мочи (x). Если подсчет производился в камере Горяева или Бюркера x=H/0,9, где H — количество подсчитанных в камере клеток (отдельно лейкоцитов и эритроцитов), а 0,9 – объем камеры. При подсчете в камере Фукс- Розенталя x=H/3,2, так как объем камеры 3,2 мм3. Расчет числа форменных элементов, выделенных за 1 минуту, проводят по формуле:

A – количество клеток, выделенных с мочой за минуту,

x – число клеток в 1 мкл осадка (раздельно для лейкоцитов и эритроцитов),

1000 – объем осадка (в кубических миллиметрах),

V – объем мочи, выделенной за 3 часа (в миллилитрах),

S – количество мочи, взятой для центрифугирования (в миллилитрах),

t – время, за которое собрали мочу (в минутах).

Нормальные значения. В норме количество лейкоцитов в минутном объеме мочи составляет 2000, эритроцитов – 1000. Иногда в литературе можно встретить другие цифры нормы: лейкоцитов в минутном объеме мочи – 2500, эритроцитов – 2000.

При необходимости цифры минутного объема можно рассчитать на 24 часа и таким образом получить число Каковского-Аддиса.

Что означают желчные пигменты в моче

Состав и концентрация растворенных в моче веществ отражают ход всех видов обмена. Ненужные продукты метаболизма выделяются из организма с мочой, если размер их молекул позволяет проходить сквозь почечный фильтр. Остальные – направляются в кишечник.

Желчные пигменты в моче присутствуют в очень незначительном количестве. Именно они окрашивают урину в желтоватые цвета. Обычными лабораторными методами выявить этот минимум невозможно, да и не считается необходимым.

В случае потемнения цвета мочи до «оттенка пива» возникает подозрение на рост концентрации желчных пигментов, вызванный их повышенным содержанием в крови. Проведение анализа мочи с качественными и количественными реакциями позволяет правильно поставить диагноз.

Какие пигменты желчи попадают в мочу

В моче обнаруживаются 2 вида желчных пигментов:

Что такое билирубин?

Распад эритроцитов крови вызывает повышенный выход гемоглобина. Именно из него в печени образуется билирубин. Вещество может присутствовать в крови в двух состояниях:

  • свободный билирубин (неконъюгированный) – через барьер почечной мембраны не проходит, значит в моче его в норме не бывает, несмотря на повышенный уровень;
  • связанный (конъюгированный) – вступает в реакцию с глюкуроновой кислотой, становится растворимым соединением и выводится в мочу, желчь, а с нею в кишечник.

Превращения происходят в печеночных клетках. Билирубинурия обусловлена повышенным содержанием связанного билирубина в крови.

Как образуется уробилиноген?

Уробилиноген является продуктом последующей переработки билирубина в кишечнике силами:

  • ферментов слизистой оболочки;
  • бактерий.

Более современные данные указывают на наличие уробилиногеновых тел, к которым относятся производные:

  • мезобилирубиноген,
  • i-ypoбилиноген,
  • уробилиноген IX a,
  • d-уробилиноген,
  • «третий» уробилиноген.

Образование уробилиногена из связанного билирубина происходит в верхней части тонкого и начале толстого кишечника. Некоторые исследователи считают, что он синтезируется клеточными ферментами дегидрогеназами в желчном пузыре при участии бактерий.

Небольшая часть уробилиногена сквозь стенку кишечника всасывается в портальную вену и возвращается в печень, где подвергается полному расщеплению. Другая – перерабатывается в стеркобилиноген.

Далее, через геморроидальные вены, эти вещества могут попасть в общий кровоток, почками выделяются в мочу. Большая часть стеркобилиногена в нижних отделах кишечника трансформируется в стеркобилин и выводится с калом. Это основной пигмент, обеспечивающий окраску испражнений.

Нормальным уровнем в моче считается не более 17 мкмоль/л. Если моча недолго контактирует с воздухом, уробилиноген подвергается окислению кислородом и превращается в уробилин. Это можно проследить по цвету:

  • уробилиноген бесцветное вещество, свежая моча имеет соломенно-желтый оттенок;
  • через некоторое время из-за образования уробилина она темнеет.

О чем «говорят» пигменты мочи?

Учитывая биохимические превращения и свойства желчных пигментов, их определение может считаться достоверным признаком поражения печени, неспособности справиться с утилизацией продуктов распада эритроцитов.

Читать еще:  Китайские средства для повышения потенции у мужчин

При выявлении билирубинурии следует предположить 2 варианта патологии:

  • нарушение работы клеток печени (воспаление, потеря количества из-за замены рубцовой тканью, сдавление отеком, расширенными и переполненными желчными ходами), этот процесс подтверждают проверкой содержания в крови аспарагиновой и аланиновой трансаминаз, щелочной фосфатазы, общего белка;
  • скопление в крови повышенного содержания гемоглобина из разрушенных эритроцитарных клеток, для уточнения потребуется исследование процесса кроветворения, анализ пунктата костного мозга.

Когда нарушается содержание билирубина в моче?

Неконъюгированный билирубин появляется в крови при заболеваниях печени:

  • вирусных гепатитах;
  • токсическом гепатите при отравлениях ядовитыми веществами (лекарствами);
  • тяжелых последствиях аллергии;
  • циррозе;
  • кислородной гипоксии печеночной ткани при сердечной недостаточности;
  • метастатическом поражении раковыми клетками из других органов.

Но в мочу он не переходит из-за невозможности фильтрации. Только в случае почечно-печеночной недостаточности с разрушением мембраны нефронов его можно обнаружить в урине.

Эти же заболевания сопровождаются накоплением конъюгированного билирубина. По его уровню в крови судят о степени поражения печеночной ткани. «Почечным порогом» для билирубина считается уровень в 0,01-0,02 г/л.

Если функция печени не нарушена, но затрудняется отток желчи в кишечник, то в кровь поступает значительное количество связанного билирубина и соответственно растет его выделение с мочой. Этот вариант патологии развивается при:

  • желчекаменной болезни;
  • сдавливании желчного протока опухолью головки поджелудочной железы или отечностью при остром панкреатите.

Билирубинурия появляется в результате замедленного потока желчи в междольковых протоках (холестаза), просачивания желчи в кровеносные сосуды. У пациента выражается в желтушности кожи и склер. По соотношению в крови и моче свободного – связанного билирубина определяют вид желтухи (механическая или паренхиматозная, подпеченочная или печеночная).

О чем судят по содержанию уробилиногена?

В диагностике имеет значение как повышенный, так и пониженный уровень пигмента в моче. Рост верхнего нормального уровня возможен за счет:

  1. Поражения паренхимы печени, но сохранения поступления основной массы желчи в кишечник. Возвращенная по воротной вене часть пигмента не перерабатывается клетками гепатоцитами в связи с их функциональной неполноценностью. Поэтому уробилиноген выводится в мочу.
  2. Активации гемолиза (разрушения эритроцитов) – в кишечнике идет усиленный синтез уробилиногеновых тел и стеркобилина. При этом возвращающаяся часть уробилиногена расщепляется работающей печенью до конечного продукта (пентдиопента), а стеркобилин уходит по геморроидальным венам в общий кровоток, почки и выделяется с мочой.
  3. Кишечных заболеваний – которые сопровождаются усилением обратного всасывания стеркобилиногена через пораженную стенку (длительные запоры, энтероколиты, хроническая кишечная непроходимость, холангиты).

Механизм гемолиза характерен для таких болезней, как:

  • малярия;
  • анемия Аддисона-Бирмера;
  • крупозная пневмония;
  • инфекционный мононуклеоз;
  • болезнь Верльгофа;
  • некоторые виды геморрагического диатеза;
  • сепсис.

Массивный гемолиз вызывается:

  • осложнением массивных внутренних кровотечений;
  • переливанием несовместимой по группе крови;
  • рассасыванием крупных гематом.

Паренхиматозная недостаточность бывает вторичной при расстройствах кровообращения после инфаркта миокарда, развитии сердечной слабости. Лечение цирроза печени методом наложения шунта для устранения портальной гипертензии может осложниться тромбозом почечной вены.

Снижение концентрации уробилиногена указывает на:

  • закупорку желчевыводящих путей за счет камня или сдавления опухолью;
  • торможение образования желчи вплоть до полного прекращения при тяжелом течении гепатитов, токсическом повреждении печени.

Методы качественного и количественного определения пигментов в моче

Качественные пробы позволяют выявить вещество, но не указывают на его массу. Пробы на билирубин основаны на способности при окислении йодом или азотной кислотой образовывать соединение зеленого цвета (биливердин). В пробирку с 5 мл мочи послойно доливают йодсодержащий раствор (Люголя, йодид калия, спиртовую настойку).

Для выявления уробилина из мочи удаляют билирубин, который мешает реакции, раствором кальция хлорида и аммиака, затем проводят различные пробы:

  • с сульфатом меди – мочу соединяют с сульфатом меди, затем с раствором хлороформа, после взбалтывания появляется интенсивный розовый цвет;
  • с помощью спектроскопа – остается сине-зеленая часть спектра.

В зависимости от интенсивности окраски в заключении могут поставить кресты:

  • (+) – реакция слабоположительна;
  • (++++) – резкоположительна.

Подробное определение количества желчных пигментов в моче проводится с помощью биохимических реактивов в специальных клиниках. Дело в том, что изучение желчных пигментов более показательно по результатам анализов крови, а не мочи.

Когда необходимо проверить анализ мочи на желчные пигменты?

Качественные тесты на желчные пигменты входят в обязательный перечень стандартного анализа мочи. Поэтому при жалобах пациента на:

  • диспепсические расстройства;
  • неясные боли в подреберье справа;
  • желтушность склер, кожи;
  • потемнение мочи и светлую окраску кала;
  • необходимо исключить заболевания печени, желчного пузыря.

Отравления различными ядовитыми веществами сопровождаются поражением функции почек и печени. По выявлению желчных пигментов ориентировочно можно предположить степень расстройств.

При тяжелых заболеваниях миокарда положительный анализ указывает на вовлечение печеночной ткани в формирование общей гипоксии.

Имеются ли особенности сбора мочи на анализ?

При сборе мочи следует выполнять общие требования:

  • обязательная гигиена наружных половых органов;
  • для исследования пригодна только средняя порция утренней мочи;
  • контейнер с мочой не должен храниться более двух часов, не нужно оставлять прозрачную банку на свету;
  • для анализа достаточно 50 мл.

Желчные пигменты мочи участвуют в метаболизме важных органов и системы кроветворения. Их определение в моче играет значительную роль в диагностике.

Ссылка на основную публикацию
Adblock
detector