0 просмотров
Рейтинг статьи
1 звезда2 звезды3 звезды4 звезды5 звезд
Загрузка...

15 иерсинии микробиологическая диагностика псевдотуберкулёза и кишечного иерсиниоза

Мир науки

Рефераты и конспекты лекций по географии, физике, химии, истории, биологии. Универсальная подготовка к ЕГЭ, ГИА, ЗНО и ДПА!

Микробиологическая диагностика иерсиниоза

Кишечный иерсиниоз и псевдотуберкулез — острые инфекционные заболевания, протекающие с преимущественным

поражением желудочно-кишечного тракта. Возбудители принадлежат к семейству Enterobacteriaceae, рода Yersinia (Y.pseudotuberculosis и Y. enterocolitica).

Микробиологической диагностики этих заболеваний используют микроскопический, бактериологический, серологический и аллергологический методы.

Материалом для исследования кровь, моча, стул, продукты питания.

Микроскопический метод. В мазках, изготовленных из испражнений, мочи и крашеных по Граму Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica имеют вид безспорових грамотрицательных палочек размером от 1-3 — 0,5-0,8 мкм. Оба вида бактерий подвижные при температуре 18-20ºС и неподвижные при температуре 37 ° С.

Бактериологический метод. Основан на выделении возбудителя, как правило, с каловых масс больного. Сначала материал для исследования высевают в жидкие среды накопления (фосфатно-буферный раствор, 1% пептонная вода) и выдерживают в холодильнике при температуре 5-6 ° С для накопления иерсиний в микробных ассоциациях. При недостаточности питания и низкой температуре иерсинии накапливаются быстрее других энтеробактерии. На 3-5 сутки выполняют висел из среды накопления на чашки Петри со средами Эндо, Плоскирева, Серова, предварительно обработанные слабым раствором щелочи, и помещают в термостат для культивирования.

Y. enterocolitica на плотных средах образует мелкие, круглые, выпуклые блестящие колонии с ровными краями, с блакитино-серым оттенком. В процессе старения колонии сливаются и растут сплошь. На среде Эндо образуются колонии с розовым оттенком. В редких питательных средах наблюдают диффузный рост в виде помутнения.

Y. pseudotuberculosis образуют как S- так и R-формы колоний. S-формы Y. pseudotuberculosis — мелкие, блестящие, серовато-желтые и менее прозрачные чем в Y. enterocolitica. На среде Эндо колонии бесцветные. R-формы — выпуклые, бугристые, средних размеров, часто с фестончатыми краями. В процессе старения колонии увеличиваются в размерах и теряют свою прозрачность. В жидкостных питательных средах иерсинии дают диффузный рост в виде помутнения или в виде осадка хлопьев, оставляя среду прозрачным. Отбирают подозрительные колонии, выросшие и изготавливают из них мазки, которые окрашивают по Граму, микроскопируют. Часть колонии, которая остались, пересевают на скошенный питательную среду для накопления чистой культуры микробов. Пробирки помещают в термостат на 48-72 часов при температуре 22-30 ° С.

Полученную чистую культуру микроорганизмов высевают в пестрый ряд Гиса для изучения биохимических свойств.

Иерсинии не образуют сероводорода, проявляют уреазная активность. Ферментируют большинство углеводов, исключая лактозу и мычать, без образования газа. В иерсиний псевдотуберкулеза реакция Фогеса-Проскауера всегда отрицательная, тогда как в кишечных иерсиний при температуре 22-28 ° C она положительная. Псевдотуберкульозни микробы от кишечных иерсиний отличаются по отношению к сахарозы и рамнозы, лизабельнистю псевдотуберкульозним бактериофагом и аглютинабельнистю соответствующими видовыми сыворотками.

Для изучения антигенных свойств выполняют реакцию агглютинации на стекле с адсорбированной диагностической сывороткой при разведении 1:10. Результаты оценивают через 3-5 минут.

Серологический метод. С целью выявления специфических антител в крови больного используют реакцию агглютинации и реакцию пассивной гемагглютинации (см. Приложение). Исследуют парные сыворотки, отобранные в начале и на 3-й неделе заболевания. Развернутая РА типа Видаля выполняется с соответствующими диагностикумами. Реакцию считают положительной при титре антител 1: 200 и выше. Реакцию пассивной гемагглютинации (РПГА) ставят с эритроцитарных псевдотуберкульозним и кишковоиерсиниозним диагностикумами. РПГА считается положительной при титре 1: 160 — 1: 200 и выше.

При исследовании парных сывороток, наиболее вероятным считают прирост титров антител в 4 раза и больше.

Читать еще:  Аденома простаты 2 степени нужна ли операция

В экспресс-диагностике псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза для выявления антигенов иерсиний в материале, который исследуется, в первые дни заболевания может быть использован ИФА (см. Приложение).

Аллергологический метод. Для постановки внутрикожной пробы * используют алергодиагностични препараты «псевдотуберкулин» и «ентероиерсин». Учет пробы проводят через 24 часа. Реакция считается положительной, если в месте введения 0,1 мл аллергена образуется папула и зона гиперемии диаметром 10 мм и более.

Микробиологическая диагностика иерсиниозов

Энтеропатогенные иерсинии (Yersinia enterocolitica, Yersinia pseudotuberculosis) вызывают кишечные инфекции, характеризующиеся поражением лимфоидного аппарата кишеч­ника, токсико-аллергическими осложнениями, развитием генерализованных процессов.

Микробиологическая диагностика иерсиниозов включает бактериологическое и серологическое исследования.

Бактериологическое исследование.Материал, подлежащий исследованию (фекалии, кишечные биоптаты, лимфоузлы или ткань удаленного аппендикса, кровь, слизь из ротоглотки), об­рабатывают в течение 1 минуты 0,5% раствором гидроксида ка­лия в 0,5% хлориде натрия, затем делают посевы на агар CIN, Серова или среду Эндо, которые после посева инкубируют при 32 °С в течение 24—48 ч или 24 ч при 37 0 С и столько же при комнатной температуре. Параллельно посевы помещают в холодильник при температуре +4 0 С (иерсинии хорошо растут при низ­ких температурах). Пересевы со среды накоп­ления выполняют на 3, 5, 10, 15-е сутки на указанные выше питательные среды.

На 2-й (3-й) день изучают первичные посевы. Энтеропатогенные иерсинии образуют более мелкие колонии, чем прочие энтеробактерии, на среде CIN колонии имеют красный центр и бесцветную периферию («бычий глаз»), на среде Эндо колонии бесцветные или с более интенсивно окрашенным центром. У Y. enterocoliticaиу Y. pseudotuberculosisчасто наблюдается диссоциация колоний с переходом в R (шероховатые) формы. Характерные для иерсиний ко­лонии пересевают для накопления чистой культуры на скошенный МПА или на среду Ресселя или Олькеницкого.

На 3-й (4-й) день проводят идентификацию чистой культуры по биохимическим и антигенным свойствам (биовар, серогруппа с помощью РА у культур, выращенных при температуре ниже 30 0 С), учитывают тем­пературу физиологического оптимума иерсиний (28-30 0 С), определяют чувствительность к анти­биотикам. Воз­будители иерсиниоза и псевдотуберкулеза оксидазоотрицательны, ферментируют до кислоты глю­козу, обладают нитратредуктазой и другими свойствами (см. табл. 5).

В отличие от возбудителя псевдотуберкулеза, бактерии вида Y. enterocoliticaпо биологическим свойствамгетерогенны, включая безусловно-патогенные, условно-патогенные (возбудители оппортунистической инфекции или пищевого отравления) и непатогенные для человека иерсинии. Определение факторов виру­лентности у Y. enterocoliticaпредполагает постановку реакций аутоагглютинации и кальцийзависимости, пиразинамидазного теста, определение плазмидассоциированных антигенов.

Тест аутоагглютинации.В две пробирки со средой Кларка за­севают исследуемый штамм, инкубируют в течение 24 ч одну пробирку при 37 0 С, другую — при 26 — 28 0 С. При наличии вирулентности бактерии, выращенные при температуре 37 0 С, склеиваются в виде хлопьев, оседающих на дно и стенки пробирки. Культура, инкубированная при температуре 26 – 28 0 С, не агглютинируется.

Определение пиразинамидазной активности.На скошенную среду с пиразинамидом, засевают исследуемые культуры, выращенные при температуре 25-30 0 С на ПА, инкубируют при той же температуре в течение 48 часов, после чего смачивают скошенную поверхность раствором суль­фата аммонийного железа, оставляя пробирку при комнатной температуре в течение 15 мин. В пробирках с культурами патогенных иер­синий цвет среды остаются без изме­нений; непатогенные иерсинии меняют цвет скошенной части среды на коричневый.

Тест кальцийзависимости ставят на кальций-дефицитном агаре, который готовят путем добавления раствора оксалата натрия к расплавленному МПА. После перемешивания вносят 4 мл 0,5М раствора хлорида магния. Исследуемую культуру засевают на 2 чашки с кальций-дефицитным агаром, одну чашку инкубируют 24 — 48 часов при 37 0 С, другую — при 26 — 28 0 С. При наличии вирулентности при дефиците кальция у клеток, инкубированных при 37 °С (но не 26 – 28 0 С), прекращается рост бактерий, при этом колонии на чашке либо имеют карликовые размеры (Y. enterocolitica), либо отсутствуют совсем (чаще у Y. pseudotuberculosis). При 26 – 28 0 С так же, как у непатогенных иерсинии при двух температурных режимах, на­блюдается рост колоний обычных размеров.

Читать еще:  Лечение аденомы простаты витафоном

Серологическое исследованиезаключается в постановке РА, РНГА или ИФА с иерсиниозными диагностикумами и парными сыворотками крови больных с подозрением на иерсиниоз с целью определения специфических антител.

Генодиагностика – обнаружение типичных фрагментов ДНК патогенных иерсиний в клиническом материале или пищевых продуктах мето­дами ДНК-ДНК-гибридизация или ПЦР-анализа.

Иерсиниозы (псевдотуберкулез, кишечный иерсиниоз) псевдотуберкулез

Этиология. Возбудитель — грамотрицательная палочка — Yersinia pseudotuberculosis. Спор не образует, имеет капсу­лу, анаэроб, образует эндотоксин. При нагревании до 60°С возбудитель гибнет через 30 мин, дезинфицирующие средства (2% раствор хлорамина, растворы лизола, сулемы и др.) убивают его в течение 1 мин, кипячение — через 10 с.

Псевдотуберкулезный микроб имеет соматический 0-антиген и жгутиковый Н-антиген. В настоящее время известно 6 сероваров, каждый из них может вызвать заболевание у человека, однако чаще встречается 1-й и 3-й серовары.

Эпидемиология. Источником инфекции являются дикие и домаш­ние животные. Микроб обнаружен у 60 видов млекопитающих и у 26 видов птиц. Основной резервуар инфекции — мышевидные грызуны, они инфицируют продукты литания и воду, в которых псевдотубер­кулезные микробы легко размножаются. Роль человека как источни­ка инфекции остается не доказанной.

Микробы в течение нескольких месяцев сохраняются в воде, масле, хлебе, молоке, в почве при благоприятных условиях — около года.

Заражение человека происходит через рот (алиментарным путем) при употреблении инфицированной пищи (салаты, фрукты, молочные продукты, вода и др.), не подвергнутой терми­ческой обработке.

Заболевания псевдотуберкулезом регистрируются в течение всего года, максимум заболеваемости приходится на зимне-весенние месяцы (февраль-март), что принято объяснять более широким употреблением в пищу овощей и фруктов, поступающих из овоще­хранилищ, где они были инфицированы грызунами.

Патогенез. Возбудитель с инфицированной пищей или водой про­никает через рот (фаза заражения) и, преодолев желудочный барь­ер, попадает в тонкий кишечник, где находит благоприятные усло­вия для размножения (энтеральная фаза), следствием чего являются воспалительные изменения в слизистой оболочке тонкой кишки. Из кишечника микробы проникают в регионарные лимфатические узлы и вызывают лимфаденит (фаза регионарной инфекции). Затем микробы и их токсины поступают в кровь, и возникает фаза генерализации инфек­ции (бактериемия и токсемия), она соответствует появлению клини­ческих общетоксических симптомов болезни. Дальнейшее прогрессирование процесса связано с фиксацией возбудителя клетками ретикулоэндотелиальной системы, преимущественно в печени и селезенке. Кли­нически это проявляется увеличением печени и нередко селезенки, нарушением их функций. По-видимому, таким путем осуществляет­ся элиминация возбудителя, при этом возможны повторные генера­лизации инфекции и возникновение обострении и рецидивов. В конечном итоге наступает стойкая фиксация возбудителя и элиминация его вследствие активации как клеточных факторов иммунологической защиты, так и выработки специфических антител. Насту­пает клиническое выздоровление. Продолжительность иммунитета точно не установлена, но есть основания считать его стойким.

Клиника. Инкубационный период 3-18 дней.

Опорными симптомами заболевания являются:

Фебрильная лихорадка (температура в первые же дни заболевания повышается до 38-40°С)

Выраженный интоксикационный симптом (общая слабость, головная боль, бессонница, плохой аппетит, иногда чувство озноба, мышеч­ные и суставные боли)

Боли в животе преимущественно в правой подвздошной области, расстройство стула редко. Болезненность и урчание в правой подвздошной области при пальпации. Язык покрыт белым налетом, к 4-5 дню болезни очищается и приобретает вид “малинового” (ярко-красный с гипертрофированными сосочками)

Читать еще:  Жжение простаты причины диагностика лечение

Увеличение печени и селезенки

Одутловатость и гиперемия лица, шеи (симптом “капюшона”), что контрастирует с бледным носогубным треугольником, гиперемия конъюнктив и инъекция сосудов склер; симптом «перчаток» (отграниченная розово-синюшная окраска кистей), симптом «носков» (отграни­ченная розово-синюшная окраска стоп).

Катаральные явления со стороны верхних дыхательных путей, гиперемия слизистых ротоглотки.

На коже туловища у 70-80% больных отмечается сыпь. Она чаще появляется на 2-4 день болезни. Чаще локализуется внизу живо­та, в подмышечных областях и на боковых поверхностях туловища. Высыпает одномоментно, по характеру бывает точечной, напоминает скарлатинозную, но может быть и более крупной. По цвету сыпь бывает от бледно-розовой до ярко-красной, может располагаться как на гиперемированном, так и на неизмененном фоне. Более крупные высыпания (мелкопятнистая сыпь) располагаются вокруг суставов, где они образуют сплошной эритематозный фон. Сыпь держится не более 3-7 дней. У 1/3 больных сразу после исчезновения сыпи наступает пластинчатое шелушение на кистях и стопах, отрубевидное на спине, груди и шее.

Артралгический синдром (гиперемия и припухлость суставов, ограничение движения в них; обычно пора­жаются лучезапястные, межфаланговые, коленные и голеностопные суставы.)

Общий анализ крови: лейкоцитоз, нейтрофилез с палочкоядерным сдвигом, моноцитоз, эозинофилия, увеличенная СОЭ. Красная кровь изменяется незначительно.

Лабораторная диагностика. Материалом для бактериологического исследования служат кровь, мокрота, фекалии, моча и смывы из зева. Посев материала производят как на обычные питательные среды, так и на среды обо­гащения, при этом используют способность иерсиний хорошо раз­множаться при низких температурах (условия холодильника). Посевы крови и смывы из зева следует проводить в 1-ю неделю болезни, посевы фекалий и мочи — на протяжении всего заболева­ния.

Из серологических исследований используют реакцию агглютина­ции, РСК, РПГА и РТГА. Для диагностики используют также метод иммунофлюоресцении и бактериального лизиса. При постановке реакции агглютинации диагностическим считается титр 1:80 и выше. Более информативной считается постановка реакции с парными сыворотками.

Лечение. Больные псевдотуберкулезом должны соблюдать постельный режим до нормализации температуры и исчезновения симптомов интоксикации. Диета рекомендуется полноценная без существенных ограничений. Однако при появлении симптомов, указывающих на поражение желудочно-кишечного тракта или пече­ни, необходимы соответствующие ограничения.

Возбудитель часто устойчив к группе пенициллина и большинству цефалоспоринов. Предпочтительно назначение ко-тримоксазола (бисептола) (по 2 табл. 2 раза в день), тетрациклина (0,25 4 раза в день), ципрофлоксацина (по 0,25 2 раза в день). При выраженной бактериемии целесообразна комбинация одного из вышеперечисленных препаратов с гентамицином (по 0,08 в/м 2-3 раза в день). Курс лечения продолжается 7-10 дней.

Поскольку при псевдотуберкулезе часто возникают обострения и рецидивы в связи с недостаточной выработкой иммунитета, пока­заны лекарственные препараты, стимулирующие иммуногенез (метилурацил, пентоксил, большие дозы аскорбиновой кислоты, поливитамины).

Для дезинтоксикации применяют внутривенные вливания, реополиглюкина, плазмы, альбумина, 10 % раствора глюкозы, раствора Рингера. В тяжелых случаях рекомендуются глюкокортикоиды (преднизолона из расчета 1-2 мг/кг массы тела в сутки в 4 приема в течение 5-7 дней). Кортикостероиды особенно показаны при развитии узловатой эритемы и при полиартритах. В качестве десенсибилизирующей терапии больные должны получать антигистаминные препараты (супрастин, тавегил, димедрол, дипразин и др.).

Больных выписывают из стационара на 7-10-й день нормальной температуры после исчезновения всех клинических симптомов болезни и нормализации периферической крови.

Профилактика. В системе профилактических мероприятий основное внимание уделяется борьбе с грызунами, организации пра­вильного хранения овощей, фруктов и других продуктов питания, исключающей возможность их инфицирования. Специфическая профилактика не разработана.

Ссылка на основную публикацию
Adblock
detector